CONSTRUCCIÓN DEL BIOSENSOR PAR A DETECTAR ARSÉNICO EN AGUA POR APLICACIÓN TECNOLÓGICA DE LA PUCE-SI

Abstract

El arsénico es un semimetal que tiene la capacidad de formar diversos compuestos orgánicos e inorgánicos, siendo muy tóxico su forma inorgánica. En la actualidad existen diversos métodos para la cuantificación de arsénico en agua, como por ejemplo: Espectroscopia de Absorción Atómica, Kits comerciales, entre otros; los cuales poseen un alto poder de resolución, sensibilidad y reproducibilidad, sin embargo puede ser costosa y de difícil operación. Los biosensores bacterianos surgen una como alternativa económicamente más accesible, con mediciones potencialmente rápidas. El presente estudio tuvo como objetivo la elaboración de un biosensor bacteriano para la detección de Arsénico utilizando la bacteria Escherichia coli modificada. Esta cepa transformada tiene insertado el plásmido pTOP Blunt V2, el cual confiere resistencia a la ampicilina, para la realización del plásmido fueron sintetizados los genes de luminiscencia y de resistencia al arsénico. Se utilizó la técnica de Electroporación para la trasformación y recombinación de células, las cuales fueron sometidas a impulsos eléctricos controlados, posterior a ello, se cultivó en agar LB y se sometió a pruebas de tolerancia de arsénico a concentraciones de O; 0,01; 0,02; 0,04 y 0,08ppm como única fuente de energía. Se determinó la absorbancia de arsénico por metodología de Espectrofotómetro de microplacas EPOCH y Espectroscopia de Absorción Atómica (EAA), dando como resultado la ecuación: y = 0,0005x + O, 1526 de la curva con un R2 = 0,9975 con diferentes absorbancias y concentraciones. Finalmente, Se pudo tener un biosensor competente para medir concentraciones de As de 0,01 a 0,08ppm con un error de 2,8% con respecto a medición de EAA.